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细胞转染技术简介

发布时间:2016-12-13   点击次数:748次

    细胞转染技术是将外源基因导入真核细胞内的一种实验技术。常规转染技术分为稳定转染(*转染)和瞬时转染两类。稳定转染是指外源DNA 既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体存在。瞬时转染则指外源DNA/RNA 不整合到宿主染色体中,一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。

    转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例;化学介导方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法,有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。

 

各种转染方法的比较

 

转染方法

原理

应用

特点

电穿孔法

高脉冲电压破坏细胞膜电位,DNA通过膜上形成的小孔导入

稳定转染,瞬时转染均适用。

适用性广但细胞致死率高;DNA 和细胞用量大; 需根据不同细胞类型优化电穿孔实验条件。

显微注射

用显微操作将DNA 直接注入靶细胞核

适用于稳定转染和瞬时转染

转染细胞数有限,多用于工程改造或转基因动物的胚胎细胞

磷酸钙法

磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞

适用于稳定转染和瞬时转染

不适用于原代细胞,

操作简便但重复性差

有些细胞不适用

阳离子脂质体法

带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞

适用于稳定转染和瞬时转染所有细胞

 

适用性广,转染效率高,重复性好,但转染时需除血清;转染效果随细胞类型变化大

DEAE-右旋糖苷法

带正电的DEAE-右旋糖苷与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞

瞬时性转染

相对简便、结果可重复,但对细胞有一定的毒副作用;转染时需除血清

病毒介导法

通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中

稳定转染

可用于难转染的细胞、原代细胞,体内细胞等

 

     Mirus是首先研发出siRNA转染试剂的公司,也是世界上zui早开发、低细胞毒性转染试剂的公司之一。Mirus以“非病毒(如基于质粒DNA)法基因转移技术比利用病毒来转移基因具有明显的优势”为理念,沿着该思路,Mirus利用蛋白、多聚物、脂质体(结合有增强核酸转移能力的*化学物)开创了多种非病毒法基因转移技术。主要提供的转染试剂有:广谱性低毒转染试剂、细胞系特异性转染试剂、RNA转染试剂、昆虫转染试剂、3D培养细胞转染试剂和电转试剂等。

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