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白介素试剂盒详细操作规程,你知道吗?

发布时间:2022-05-19   点击次数:66次
  白介素试剂盒在的实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。
  如双抗体夹心法、间接法、竞争法、双位点一步法、捕获法测IgM抗体、应用亲和素和生物素的ELISA。白介素试剂盒TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品的浓度。
  白介素试剂盒的详细操作规程:
  1、使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。
  2、空白孔不加样,只加显色剂A,B和终止液用于调零。
  3、标准品孔:每孔加入稀释好的标准品50μl,零孔加入标准品/样品稀释液50μl,然后加入生物素抗原工作液50μl(零孔必须要做,并将其作为标曲的后一个点)。
  4、样品孔:加入样品50μl(推荐直接加样,浓度高可以用样品稀释液稀释2-5倍),然后加入生物素抗原工作液50μl。
  5、轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育30min。
  6、将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。
  7、次洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  8、加入50μl亲和素-HRP到标准品孔和样品孔中,轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育30min。
  9、第二次洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  10、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。
  11、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  12、测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后10分钟以内进行。
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