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从四个方面来说说免疫组化试剂盒的使用

发布时间:2022-09-22   点击次数:41次
  免疫组化试剂盒检测的原理是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验。计算方法是以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
  免疫组化试剂盒在没有去离子水或双蒸水时,可以使用娃哈哈纯净水配制溶液,切勿使用自来水。
  1.样品稀释:酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应,如果血清不稀释,不可避免会产生很强的非特异性反应,出现假阳性。因此,国外检测血清抗体的试剂盒,均规定将血清稀释至适当的倍数,以降低非特异性反应,使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。样品稀释倍数均通过大量试验确定,以保证试验的灵敏度和特异性。但是,有些用户未能严格按使用说明书操作,如产品应取10u1样品进行稀释,个别用户取5u1甚至1u1样品进行稀释,由于吸嘴上不可避免地沾有样品以及微量移液器的精度不够,因此造成样品稀释倍数不准确,检测结果出现问题。
  2.试剂盒平衡:试剂盒中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温(约25℃),一般需在室温放置20~30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不够,样品孵育时间相对缩短,ELISA反应不够充分。冬季室温低,可将试剂盒打开盒盖置37℃温箱20分钟。稀释前、后的样品需要充分混匀,所有试剂在加样前也须摇匀,以保证试验的均一性。
  3.加样:尽量操作规范,将液体垂直悬空快速加入到微孔板中,避免加到孔避上。加完试剂后用手适当振荡或在桌面适当作圆周运动,使孔内试剂充分混匀,盖好盖板膜。
  4.洗板:洗液尽量不要溢出孔外;加洗液后要静置10-15s,甩去板孔中洗液后,一定要用力拍干;及时更换吸水纸,尤其是拍过酶标记物的吸水纸一定要弃去,否则可能影响试验结果。
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