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链霉亲和素(安捷伦)使用窍门与技巧

发布时间:2022-10-24   点击次数:144次

在使用安捷伦链霉亲和素产品的时候,可能很多客户对有些部分不知道怎么使用,或者对产品有一些问题疑惑。那通过本文讲解链霉亲和素使用窍门与技巧,就能帮助大家解决这些问题了。当然,更多关于链霉亲和素使用的问题,如本文没提及到,可以联系我们欣博盛生物。

链霉亲和素(安捷伦)使用窍门与技巧


1.我可以用水溶解冻干链霉亲和素吗?还是必须用 PBS?

链霉亲和素易溶于水或含盐缓冲液,浓度高达 50 mg/mL 以上。在中性或酸性 pH 条件下,冻干链霉亲和素在重新溶解于水或其他低离子强度缓冲液时,可能会发生聚集。安捷伦链霉亲和素已在弱碱性 pH 下从稀氯化钠溶液中冻干,从而尽可能减少聚集体的形成。在极少数情况下,链霉亲和素在溶于去离子水或低离子强度缓冲液时可能含有少量的不溶物质,无论是在最初溶解时还是在冻融循环后。在含盐缓冲液(例如 PBS)存在的情况下,通常观察不到这种效果。如果观察到未溶解物质,可以通过离心将其去除,它们不会构成总蛋白质的重要部分。


2.如何复溶链霉亲和素以避免形成聚集体?

对于 1 g 或 100 mg 溶液瓶,我们的标准技术是加入足量的缓冲液,使其溶解至 20–50 mg/mL,然后立即开始旋转溶液瓶。例如,您可以将溶液瓶放在工作台上,并以紧密的圆周运动方式将其迅速移动。继续旋转直到蛋白质溶解,这可能需要几分钟,从而尽可能减少聚集体的形成。如果之后有一点混浊,请先通过离心将其去除再使用该材料。当以这种方式溶解时,离心后的回收率应与溶液瓶上显示的 A280 测量结果一致。


在溶于水或低离子强度缓冲液时,避免聚集体形成是最重要的一点(如 SA10 技术数据表中所述)。在 PBS 和更高离子强度缓冲液中复溶链霉亲和素似乎对持续搅动不太敏感。然而,即使在使用 PBS 时也不要只是添加缓冲液,让溶液瓶保持不动,然后等待链霉亲和素溶解。对于分配到微量离心管中的 10 mg 样品和其他样品,添加足量的缓冲液使其溶解至 5–50 mg/mL。然后通过上下移液进行混合,直到观察到内容物已经溶解。对于这样的少量样品,复溶非常迅速。


3.产品中是否含有盐等添加剂?

安捷伦链霉亲和素以冻干形式提供,每毫克冻干产品含有约0.9 mg 蛋白质;其余为氯化钠。因此,每毫克冻干产品含有0.1 mg 氯化钠 (10%)。但我们按蛋白质含量进行分配,如果您购买一克链霉亲和素,您将收到一克链霉亲和素和额外的盐,而不是总共一克冻干产品。我们提供 NaCl 的含量信息,为称量产品的客户提供参考。


4.在SDS-PAGE 凝胶上观察到的 SA10 链霉亲和素分子量应该为多少? 

(分析证书指出该产品应主要作为 SDS-PAGE 的单一条带运行。)

链霉亲和素是分子量约为 52 kDa 的同源四聚体。随着SDS-PAGE 样品缓冲液中的热变性,链霉亲和素四聚体

分解为单体,在 SDS-PAGE 凝胶上以约 13 kDa 运行。在SDS-PAGE 处理之前,必须将链霉亲和素加热至沸腾(例如,在含有 0.2% SDS 的上样缓冲液中于 100 °C 下加热 20 分钟),使蛋白质*变性。否则,四聚体可能无法*分解为单体,SDS-PAGE 上可能出现四聚体形式。链霉亲和素中没有半胱氨酸残基(因此没有二硫键),因此样品缓冲液中是否存在还原剂(如 DTT 或 β-巯基乙醇)不会有什么不同。


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