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免疫组化试剂盒的基本原理和使用要点

发布时间:2022-11-23   点击次数:51次
  免疫组化试剂盒的基本原理是抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水 性部分相互吸附,并保持其免疫学活性;  抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学 和酶学活性; 酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反 应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。
  免疫组化试剂盒避免显色淡及灵敏度偏低的方法:
  A、尽量缩短运输时间,夏季应放冰块降温。
  B、免疫组化试剂盒从2~8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟,确保所有试剂已平衡至室温。
  C、注意培养箱温度,放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定,非隔水式培养箱尤其应注意。
  D、校正定时钟准确定时。
  E、按说免疫组化试剂盒明书要求保留洗涤时间,准确记住洗涤次数。
  F、校正移液器,吸嘴要配套,装吸嘴时要紧密,吸嘴内壁要清洁,一次性使用。
  G、使用新鲜合格的蒸馏水。
  免疫组化试剂盒的使用要点:
  1. 修复后缓冲液须自然冷却,自来水冲洗后方能把切片取出,骤冷有可能导致结晶或抗原封闭。
  2. 缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到,用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。
  3. 若试剂为微量浓缩液,用前应低速离心,将内盖和管壁附着的溶液离到底部。
  4. 封片前一定要换用TBS 充分洗涤,以便洗去组织上残留的Tween 20,否则会影响结果观察。
  5. 如须复染细胞核,则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。
  免疫组化试剂盒以HRP 标记的链霉亲和素复合物为基础,可用于检测小鼠细胞、组织内的特异性抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。
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