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多克隆抗体和单克隆抗体的区别详解

发布时间:2023-01-13   点击次数:143次

多克隆抗体和单克隆抗体的区别:

多克隆抗体
单克隆抗体
 与抗原上不同表位结合的多种不同抗体 只识别抗原上一种表位的单一抗体
 非表位特异的 表位特异的
 与相似抗原有更高的交叉反应低交叉反应
可能有较高背景干扰低背景干扰
 各批次有所不同每批次完quan一致
 成本较低成本较高
 制备耗时短 (约3个月)制备耗时长 (约6个月)
多种宿主物种可选宿主物种选择不多


什么是单克隆抗体?

Monoclonal-Antibodies-Icon/单克隆抗体定义:

单克隆抗体是仅与目标抗原某一特定表位结合的单一抗体


单克隆抗体的制备

单克隆抗体制备时首先要将免疫原注射到宿主动物体内,当免疫原诱发宿主产生免疫反应,脾脏就会产生大量不同种类的B-细胞。此时单一的B-细胞被提取出来,与骨髓瘤细胞杂交 (癌症B-细胞)。


之所以要将B-细胞与骨髓瘤细胞杂交,是因为健康正常的脾细胞无法在细胞培养基无限存活,而与骨髓瘤细胞杂交形成杂交瘤细胞后,该细胞就成为永生化胞株,不断产生抗体。


单一B-细胞从脾脏中分离,形成杂交瘤细胞后,产生的抗体就是单一抗体,只与目标抗原上某一特定的表位反应。


每一个杂交瘤生产出单一的单克隆抗体,这个杂交瘤就被赋予一个克隆号,以此来方便辨别这个特异的抗体是识别哪一个特定的表位。


B-细胞将单克隆抗体分泌至细胞培养基中,然后提取出来做后续的检测和纯化。


一旦单克隆抗体杂交瘤克隆生成,该克隆就十分稳定,可以重复使用,这就确保了每一批次的抗体是wan全一致的。


杂交瘤也可以被注射到小鼠的腹腔中大量生产,杂交瘤分泌富含抗体的一种液体,被称作腹水,用注射器抽取,就可获得大量的单克隆抗体。


单克隆抗体适用于:

检测单一抗原

检测蛋白质家族的单一成员

不同实验/批次的结果稳定一致

细胞染色背景较低-很适用于IHC、ICC、IF等应用

量化蛋白质表达(例:流式或荧光细胞分选)

探测分子结构变化

探测磷酸化状态变化

为X射线晶体学探测目标

免疫治疗


单克隆抗体不建议用于:

根据同源性检测不同物种的目标蛋白

检测浓度较低的目标蛋白

检测形态变化了的蛋白


什么是多克隆抗体?

Polyclonal-Antibodies-Icon/多克隆抗体定义

多克隆抗体是与目标蛋白上多种不同表位结合的多种不同抗体。


多克隆抗体制备

多克隆抗体的第一步和单克隆抗体一样,都是将免疫原注射到宿主体内产生免疫反应,激活了多种B细胞。不同的是免疫过后,多克隆抗体就直接从免疫宿主的血清中分离出来,或纯化,没有与骨髓瘤细胞融合的过程。一旦宿主动物死亡,需要免疫新的动物,这时血清中的抗体就会有所不同。


根据制备方法的不同,功能自然也就有所不同了。虽然多抗每批次有轻微差别,但是因为它识别的表位多,这个差别影响并不算太大,而单克隆抗体虽然价格偏高,可是特异性更强更稳定。


多克隆抗体适用于:

检测有高同源性的抗原的已知或未知同种型

检测浓度较低的抗原

捕获尽可能多的抗原(例:IP或ChIP)

检测变性的蛋白

检测可能发生了糖基化或形态变化的目标蛋白

用多种检测方法检测一种原蛋白时

检测pH和盐度不同的溶液中的目标蛋白


多克隆抗体不建议用于:

量化检测,例:流式。由于不同表位的结合导致信号被放大加强,可能会导致结果不准确

当高同源性蛋白的交叉反应会引起问题时


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