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CAR-T细胞基因转导

更新时间:2023-02-01   点击次数:402次

转染试剂


稳定转染是效应T细胞稳定表达CAR的前提。目前用于CAR-T的基因转导的方法主要有逆转录病毒转导、慢病毒转导和mRNA转染。

Mirus公司的TransIT-VirusGEN®转染试剂可提高载体转染到贴壁或悬浮HEK 293细胞的效率,并有效提高重组腺相关病毒和慢病毒的产量。除了科研级别,Mirus还推出了临床前级别的TransIT-VirusGEN® SELECT Transfection Reagent。TransIT-VirusGEN®SELECT转染试剂优于PEI和PEIpro®试剂,是临床前和早期临床试验中大规模病毒生产的理想选择。Mirus也计划推出GMP级别的TransIT-VirusGEN®转染试剂。


产品优势:


高效 — 实现高滴度病毒大规模生产中DNA高效转染

验证 — 经测试确认配方特性,无菌、低内毒素水平、无支原体

灵活 — 可与不同的重组病毒平台和细胞培养系统兼容

安全 — 完quan合成的配方,无动物来源成分


CAR-T细胞基因转导

分别使用T ® ransIT-VirusGEN SELECT Transfection Reagent ® (3:1, vol:wt), 25 kDa PEI (4:1, Polysciences) 和 PEIpro (2:1, Polyplus Transfection)将第三代载体pLKO.1-puro-CMVTurboGFP™和ViraSafe™ Pantropic Packaging mix (pRSV-Rev, pCMV-VSV-G, pCgpV, Cell Bio Labs)( 3:0.5:0.5:2 DNA ratio, 1 μg/ml total plasmid DNA)转染至FreeStyle™ F17培养基中悬浮培养的FreeStyle™ 293-F细胞(A)和DMEM + 10% FBS中培养的贴壁293T/17细胞(C)生产慢病毒。用含病毒的上清液转导293T/17细胞,并在转导 ® 72小时后用Guava Easycyte™ 5HT流式细胞仪检测GFP表达情况。

CAR-T细胞基因转导

分别使用T ® ransIT-VirusGEN SELECT Transfection Reagent ® (2:1, vol:wt), 25 kDa PEI (2:1, Polysciences) 和 PEIpro (2:1 or 4:1, Polyplus Transfection)将pAAV-hrGFP, pAAV-RC和 pAAV Helper plasmids (1:1:1 DNA ratio, 1.5 μg/ml plasmid DNA, Agilent Technologies)转染 至FreeStyle™ F17培养基中悬浮培养的FreeStyle™ 293-F细胞(B)及DMEM + 10% FBS中培养的贴壁293T/17细胞(D)生产腺相关病毒2型(AAV2)。用收集的病毒转导HT ® 1080细胞,转导48h后用Guava easyCyte™ 5HT流式细胞仪检测GFP表达情况。慢病毒和AAV的功能滴度都是根据GFP阳性细胞少于20%的病毒稀释度计算的。

TransIT-VirusGEN SELECT在悬浮和贴壁细胞培养系统中优于25 kDa线性PEI和PEIpro 转染试剂


品牌产品编号产品名称规格
MirusbioMIR 6700TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent1.5 ml
MirusbioMIR 67030.3 ml
MirusbioMIR 67040.75 ml
Mirusbio

MIR 6705

5x1.5 ml
MirusbioMIR 670610x1.5 ml
MirusbioMIR 6730TransIT-VirusGEN® SELECT Transfection Reagent 30 ml

美国品牌Cellbiolabs可提供一系列用于病毒表达、病毒包装、病毒浓缩和纯化、病毒滴度检测的研究工具。


病毒纯化试剂盒


品牌
产品编号产品名称规格产品特点
Cell BiolabsVPK-5112PureVirus™ Adenovirus Purification Kit10 preps操作时间小于2小时,无需超速离心,回收率>60%~70%
Cell BiolabsVPK-099ViraBind™ Adenovirus Miniprep Kit10 preps使用特殊离心柱,操作时间小于2小时,回收率>90%
Cell BiolabsVPK-140ViraBind™ AAV Purification Kit10 preps

用于纯化AAV-2与AAV-DJ,3小时内获得纯度>95%的AAV病毒

Cell BiolabsVPK-140-T2 preps
Cell BiolabsVPK-141ViraBind™ AAV Purification Mega Kit
2 preps用于纯化AAV-2与AAV-D,J 3小时内获得纯度>95%的AAV病毒,回收率>60%
Cell BiolabsVPK-141-510 preps


病毒滴度检测试剂盒


品牌产品编号产品名称规格产品特点
Cell Biolabs

VPK-107

VPK-107-5

VPK-107-T


QuickTiter™ Lentivirus Titer Kit 

(Lentivirus-Associated p24 ELISA)

96 assays

5x96 assays

32 assays

专li技术将慢病毒相关p24蛋白与游离p24蛋白分开,避免传统方法检测总P24蛋白导致的误差
Cell BiolabsVPK-112QuickTiter™ Lentivirus Quantitation Kit20 assays

快速定量,操作过程45~60分钟

可检测纯化前或纯化后病毒核酸浓度

Cell BiolabsVPK-120QuickTiter™ Retrovirus Quantitation Kit20 assays

快速定量,操作过程45~60分钟

可检测纯化前或纯化后病毒核酸浓度来定量病毒滴度


Cell BiolabsVPK-110QuickTiter™ Adenovirus Titer ELISA Kit2x96 assaysELISA方法,无需空斑形成实验,避免复杂的铺琼

脂步骤,操作更简便,耗时更短

Cell BiolabsVPK-109

VPK-109-T

QuickTiter™ Adenovirus Titer Immunoassay Kit

100 assays

20 assays

免疫细胞化学方法,无需空斑形成实验,避免复

杂的铺琼脂步骤,操作更简便,耗时更短

Cell BiolabsVPK-106QuickTiter™ Adenovirus Quantitation Kit20 assays

快速定量,操作过程45~60分钟

可检测纯化前或纯化后病毒核酸浓度来定量病毒滴度

Cell BiolabsVPK-145QuickTiter™ AAV Quantitation Kit20 assays快速定量,操作过程小于2小时


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