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MycoStrip™—细胞支原体污染检测技巧

更新时间:2023-05-06   点击次数:347次

支原体污染是细胞培养中一个主要的污染问题,能够严重影响实验结果的重现性和有效性。InvivoGen公司凭借40多年为科学界开发支原体解决方案的经验,开发了简单可靠的检测细胞培养支原体污染的MycoStrip™试剂盒,基于等温PCR的技术检测支原体污染,在5分钟内就能于免疫层析试纸条上快速显示结果。如需购买该产品,请联系Invivogen代理商欣博盛生物。

MycoStrip™—细胞支原体污染检测原来可以这么简单 

支原体属于柔膜菌纲,其成员特征为缺乏细胞壁以及拥有多变的形态。支原体对包括原代细胞在内的所有真核细胞类型具有高度传染性。成百上千的支原体可以附着在一个细胞上,与细胞膜融合、繁殖,最终数量可以超过培养细胞1000倍。支原体没有细胞壁的特点使它们对常用的抗生素(如青霉素和链霉素)产生抗性。 此外,它们的尺寸微小(~100 nm),能够穿透过 0.2 μm 的标准过滤膜。支原体与宿主细胞竞争营养素和代谢物前体,它们能改变许多细胞功能,影响到细胞代谢和细胞生长,最终导致细胞死亡。因此,我们需要采取预防措施来防止细胞培养物受到污染。


目前的支原体检测方法大多费时费力。Japanese cell bank验证了由InvivoGen开发的基于等温PCR的支原体快速检测试剂盒MycoStrip的有效性,并将其检测灵敏度与其他检测方法进行了比较。实验中,将M. hyorhinis支原体(NBRC 14858)加入到VERO细胞(JCRB0111)中进行培养,稀释后的样品分别用MycoStrip、生物发光法(Bioluminescence assay)、荧光染色法(Fluorescent staining)和Nested-PCR进行检测。经证实,MycoStrip的灵敏度与荧光染色的灵敏度相当,显示出足够的检测效率证明了基于等温PCR的MycoStrip是一种简单且高度通用的支原体检测方法,因为该检测方法不需要特殊设备,将试剂与样品混合并滴在试纸上即可轻松快速地获得结果。MycoStrip可普遍用于支原体污染的常规检测。

 

MycoStrip™ 优势

• 简单:只需要一个加热块

• 快速:2—5分钟内显示结果

• 轻松解读:试纸条上出现一或两条条带

• 最少的操作时间:<15分钟

• 总检测时长:<1小时

• 灵敏度高:检测限低至1 x 102 CFU/ml

• 特异性高:无交叉反应

• 稳定:试剂盒可在-20°C下保存1年

 

使用MycoStrip™检测支原体

MycoStrip™专门设计用于检测最常污染细胞培养的支原体和无胆甾原体,其中包括导致95%细胞培养污染的六个物种。重要的是,使用MycoStrip™不会与任何其他细菌、真菌或哺乳动物DNA发生交叉反应。

 MycoStrip™—细胞支原体污染检测原来可以这么简单

 

4 个简单步骤检测细胞培养物中的支原体

 

MycoStrip™—细胞支原体污染检测原来可以这么简单 

 

50 和100 strips的规格还可以提供不带卡壳的形式,更经济、环保。

MycoStrip™—细胞支原体污染检测原来可以这么简单 

 

产品组份


With cassette

Without cassette

产品名称

MycoStrip™

MycoStrip™ 50

MycoStrip™ 100

产品货号

rep-mys-10

rep-mys-20

rep-mys-50

rep-mysnc-50

rep-mysnc-100

组分

10 Tests

20 Tests

50 Tests

50 Tests

100 Tests

• Reaction Mix

1 vial

2 vials

5 vials

5 vials

10 vials

• Reaction Buffer

1 vial

2 vials

4 vials

4 vials

8 vials

• Migration Buffer

2 vials

3 vials

1 bottle

1 bottle

2 bottles

• Positive Control

1 vial

1 vial

1 vial

1 vial

2 vials

• Detection strips

10

20

50

50

100

 

结果示例

MycoStrip™—细胞支原体污染检测原来可以这么简单 

 

常见问题

1. 如果支原体检测呈阳性怎么办?

InvivoGen有解决方案!可以使用InvivoGen全面的抗支原体试剂清除和预防污染。推荐用Plasmocin™ 或Plasmocure™ ,治疗完成后(约2周),使用MycoStrip™重新检测。 

2. 收集的待测上清液中含有一些细胞,会干扰检测吗?

无需担心,哺乳动物细胞DNA的存在不会影响检测分析。 

3. 样品制备过程中,将样品加热到95°C是否有好处?

敏感度没有提高,但此步骤可以杀死支原体,避免接触活的支原体。

4. 是否每次使用MycoStrip™时都需要设立阳性和阴性对照?

包括阳性和阴性对照的定期监测,对于结果的可靠性以及故障排除很重要。

5.在什么阶段可以冻存样品以供后续检测分析?

可以按照以下方式储存样本:

• 细胞培养上清液:在开始“样品制备"方案之前,可以将上清液储存在-20°C直到需要使用时。使用前,将样品在37°C下完-全解冻,涡旋充分混匀以确保所有盐溶解。

• 已制备的样品:执行“样品制备"方案的步骤1-4之后,可以将样品存储在-20°C直至需要使用时。 

• 处理过的样品:执行“检测分析"方案的步骤1-4之后,处理过的样品在-20°C下最多保存3个月。

6. 有一个样本的测试带模糊,不能确定是否应将其视为支原体污染的阳性结果?

如果其中一个样品上观察到一条微弱的条带,可以认为这是支原体污染的阳性结果。建议使用以下方法确认此结果: 

• 浓缩样品:使用更大体积的上清液并重复“样品制备"方案中步骤2-3。使用MycoStrip™重新检测浓缩后的样品。

• 在使用MycoStrip™重新检测之前,继续培养细胞48小时。

• 使用无菌水(不含核酸酶)替代PBS重悬样品,以提高检测的灵敏度。

7. 实验室中没有热循环仪,可以使用什么代替?

可以使用校准过的加热块或水浴代替。请注意,使用水浴可能会引入新的污染源。 

8. 如果将准备好的样品在加热块上放置了一个多小时,是否仍然能使用该样品?

在65°C下孵育40分钟以上会显著影响检测结果,因此不建议继续使用此样品。

 

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产品货号

产品名称

规格

产品说明

rep-pt1

PlasmoTest™

1 kit (250 samples)

细胞比色分析法检测支原体污染

pt-ctr2

PlasmoTest™ Controls

200 tests

PlasmoTest™试剂盒对照

rep-ptrk

PlasmoTest™ Reagent Kit

500 samples

PlasmoTest™试剂盒补充试剂

ant-mpp

Plasmocin® prophylactic

25 mg (10 x 1 ml)

支原体预防试剂

ant-mpt

Plasmocin® treatment

50 mg (2 x 1 ml)

支原体清除试剂

ant-mpt-1

Plasmocin® treatment

25 mg (1 x 1ml)

支原体清除试剂

ant-pc

Plasmocure™

100 mg (1 ml)

强效支原体清除抗生素,适合用于带有Plasmocin抗药性支原体



详情请联系 Invivogen 全国代理-欣博盛生物