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检测炎症小体的激活及监测方法

更新时间:2024-02-22   点击次数:236次

炎症小体的激活有多个重要的特征,如ASC斑点的形成、促炎性细胞死亡、具有生物活性的IL-1β/18细胞因子的分泌以及HMGB1的表达。为了检测这些关键的特征,InvivoGen开发了体外研究炎症小体激活中最-常-用的人源THP-1单核细胞系模型和广泛用于报告系统的人源HEK293胚胎肾细胞系所衍生的细胞工具。


检测炎症小体激活的方法


1.使用RT-qPCR检测NF-κB诱导的pro-IL-1β和NLRP3上调

2.使用荧光显微镜或流式细胞术监测细胞系中ASC斑点的形成

3.使用 Western blot 检测 caspase-1 的裂解或 pro-IL-1β/IL-18 的成熟

4.使用ELISA测定IL-1β、IL-18或HMGB1的释放

5.使用乳酸脱氢酶(LDH)测定或碘化丙啶(PI)染色法检测细胞焦亡

6.使用检测IL-1β、IL-18分泌的报告细胞系

以上方法各有利弊,可以适当的结合这些方法来检测炎症小体的激活。


实时监测ASC斑点


THP1-ASC-GFP Cells

THP1-ASC-GFP细胞可通过荧光显微镜观察活细胞中ASC斑点的形成。它们以依赖NF-κB的方式稳定表达ASC::GFP融合蛋白。在诱导剂如Poly(dA:dT)的刺激下,炎症小体的激活可以通过观察荧光ASC斑点的组装来分析,不会干预炎症小体的应答。

检测炎症小体的激活及监测方法

产品名称产品货号规格
THP1-ASC-GFP Cellsthp-ascgfp3-7 x 106 cells


监测细胞焦亡


THP1-HMGB1-Lucia™ Cells

THP1-HMGB1-Lucia™细胞是一种可靠、方便的定量检测细胞焦亡的工具,能取代测定LDH活性的经典方法。此测定依赖于细胞溶解介导的HMGB1警报素,通过与Lucia荧光素酶的融合来测量其释放。THP1-HMGB1-Lucia™细胞经LPS启动和炎症诱导剂如Poly(dA:dT)处理后引发细胞焦亡,从而释放HMGB1::Lucia到细胞外环境中。通过测量QUANTI-Luc™检测试剂产生的光信号,可以简单监测上清液中HMGB1::Lucia的水平。

产品名称
产品货号规格
THP1-HMGB1-LuciaTM Cells3-7 x 106 cellsthp-gb1lc


实时监测IL-1β和IL-18的分泌


InvivoGen已开发出报告细胞系,能简单、快速、可靠地检测和定量具有生物活性的人源(h)或鼠源(m)IL-1β和IL-18。这些细胞来源于人源胚胎肾HEK293细胞系。在激活细胞因子信号通路后,它们表达由NF-κB/AP-1诱导的分泌型碱性磷酸酶(SEAP)报告基因。使用QUANTI-Blue™溶液检测试剂可以很容易地监测上清液中的SEAP水平。

检测炎症小体的激活及监测方法


HEK-Blue™ IL-1β Cells& HEK-Blue™ IL-1R Cells

这些细胞可以监测样本中的hIL-1α/β、mIL-1α/β。两种细胞系均表达内源性人源IL-1受体(hIL-1R)。HEK-Blue™ IL-1β细胞对人源IL-1异构体的敏感性高于鼠源的异构体。我们建议使用此细胞系来进行人源炎症小体细胞实验(例如THP1衍生分析,见第6-7页),测试上清液样本。HEK-Blue™ IL-1R细胞被稳定转染表达mIL-1R,赋予对mIL-1β更高的敏感性。因此,该细胞系更适合于从小鼠的血清或细胞突变物中检测IL-1β。然而,它们的高灵敏度可以导致一些细胞(例如RAW264.7衍生细胞)出现高背景。


值得注意的是,这两种细胞系都可以用来评估样本中IL-1α警报素的水平。HEK-Blue™ IL-1β 和 HEK-Blue™ IL-1R细胞检测一种亚型的特异性可通过在分析中加入针对另一种亚型的中和抗体来评估。

检测炎症小体的激活及监测方法

HEK-Blue™ IL-18 Cells

这些细胞提供了一个强大的细胞实验平台,监测样本中hIL-18和mIL-18的浓度。HEK-Blue™ IL-18细胞经转染稳定表达hIL-18受体。这些细胞对hIL-18比mIL-18敏感。

检测炎症小体的激活及监测方法

使用Invivogen的细胞因子传感器细胞

1.检测具生物活性的细胞因子

2.具成本效益

3.短时间的实验操作

4.肉眼可视化实验结果

5.高灵敏度、高动态范围

6.适用于药物筛选(正常或高通量筛选、药物效应动力学等)


相关产品:


产品名称规格货号
HEK-BlueTM IL-1β Cells3-7 x 106 cellshkb-il1bv2
HEK-BlueTM IL-1R Cells3-7 x 106 cellshkb-il1r
HEK-BlueTM IL-18 Cells3-7 x 106 cellshkb-hmil18



文献参考:

Martine P. et al. 2019. Cell Death Dis. doi: 10.1038/s41419-019-1491-7. HSP70 is a negative regulator of NLRP3 inflammasome activation.


Metho S. et al. 2019. Mol. Cell. doi: 10.1016/j.molcel.2018.11.08. The Crohn’s disease risk factor IRGM limits NLRP3 inflammasome activation by impeding its assembly and by mediating its selective autophagy.


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