CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0自噬检测试剂盒2.0版

目前，研究人员们常通过靶点分析对癌症靶点进行验证，进而了解和控制其调控机制，以及在癌症特征中所起的作用。自噬（Autophagy）是一种应激诱导的保护机制，该机制在基础条件下并不活跃，当受到某些负面条件影响，如营养物质耗尽和化学或遭受环境压力时，真核细胞通过溶酶体介导的细胞内容物的大量降解来利用该机制。

自噬活动的增加在癌症、神经变性疾病、心血管疾病和糖尿病等疾病的病理学研究中的作用，目前已经得到广泛认可和普遍研究。如果机体的溶酶体功能受到抑制，阻止了自噬小泡的去除，那么就可以通过增加的自噬小泡积聚量来体现自噬通量的诱导效果。

Enzo的热销产品CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0（货号：ENZ-KIT175），使用了新型染料来检测自噬小泡和监控活细胞的自噬通量，选择性标记积累的自噬小泡。488 nm可激发的绿色染料已经过了功能优化，不染色溶酶体，在自噬前体、自噬体和自噬溶酶体里呈现出明亮的荧光。该试剂盒提供了一种无需细胞转染，可以在活细胞中监控细胞自噬的快速定量方法。该试剂盒还包括用于核染色的Hoechst 33342染料、自噬诱导剂（Rapamycin）和溶酶体抑制剂（Chloroquine）。

作用机制：

CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0所用探针是一种阳离子两亲性示踪剂（CAT）染料，它能以类似诱导磷脂药物的方式迅速进入到细胞中，并选择性标记特定的功能分子。

在Enzo升级版的CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0试剂盒中，采用了优化后的新型探针，不易在溶酶体中发生积聚的同时，还能够对与自噬途径相关的小泡进行特异性地标记。

产品特点：

● 更明亮，更耐光，特异性地染色自噬小泡；

● 操作便捷，无需转染；

● 反应迅速，孵育时间只需30分钟；

● 对自噬性溶酶体的染色效果微乎其微，可以忽略不计，大大降低了背景对染色效果呈现的干扰；

● 能够快速量化原生异质性细胞群中的自噬；

● 有助于高通量筛选自噬激活剂和抑制剂；

● 业界认可度高，产品的文献引用率高。

产品实例：

Figure 1. 基于流式细胞仪的Jurkat细胞的自噬分析图。Jurkat细胞不进行处理或分别用0.5µM雷帕霉素（RAP）、10µM氯喹（CLQ）或两者同时处理20小时。用CYTO-ID® Green Detection Reagent 2染色30分钟后，清洗细胞，用流式细胞仪进行分析。结果以直方图叠加的形式呈现，用RAP+CLQ共同处理的细胞荧光明显增强。

Figure 2. HeLa细胞在(A)完-全培养基或(B)含有40 µM氯喹的饥饿培养基（EBSS）中培养4小时后，用CYTO-ID® Green Detection Reagent 2进行染色。在含有氯喹的EBSS中的饥饿细胞显示出非常明亮的绿色荧光信号和斑点状结构。

Figure 3. HepG2细胞自噬的微孔板分析。HepG2细胞在DMSO (control)、0.5 μM雷帕霉素(Rap)、10 μM氯喹(CLQ)或0.5 μM Rap+10 μM CLQ中培养20小时后，用CYTO-ID® Green Detection Reagent 2进行染色。细胞用Hoechst 33342染色后进行细胞数归一化，通过CYTO-ID® Green Detection Reagent 2检测出Rap+CLQ处理组的细胞自噬增加。

产品信息：

产品最新引用文献：

1. Amorfrutin B Protects Mouse Brain Neurons from Hypoxia/Ischemia by Inhibiting Apoptosis and Autophagy Processes Through Gene Methylation- and miRNA-Dependent Regulation: K. Przepiórska, et al.; Mol. Neurobiol. 60, 576 (2023), Abstract;

2. Brain injury accelerates the onset of a reversible agerelated microglial phenotype associated with inflammatory neurodegeneration: R.M. Ritzel, et al.; Sci. Adv. 9, eadd1101 (2023), Abstract;

3. CNS serotonin content mediating food deprivation-enhanced learning is regulated by hemolymph tryptophan concentration and autophagic flux in the pond snail: Y. Totani, et al.; Nutr. Neurosci. 26, 217 (2023), Abstract;

4. Effects of Sirolimus treatment on patients with β-Thalassemia: Lymphocyte immunophenotype and biological activity of memory CD4+ and CD8+ T cells: M. Zurlo, et al.; J. Cell. Mol. Med. 27, 353 (2023), Abstract;

5. Impaired Autophagy in Krabbe Disease: The Role of BCL2 and Beclin-1 Phosphorylation: N. Papini, et al.; Int. J. Mol. Sci. 23, 5984 (2023), Abstract;

6. Nanoparticles of folic acid-methyl-b-cyclodextrin (FA-MbCD)/adamantane-albumin exhibit enhanced antitumor activity compared with FA-MbCD alone: A. Sakai, et al.; FEBS Open Bio 13, 233 (2023), Abstract;

7. Novel hydroxamic acid derivative induces apoptosis and constrains autophagy in leukemic cells: M.A. Fischer, et al.; J. Adv. Res. (2023), Abstract;

8. Production and Characterization of K562 Cellular Clones Hyper-Expressing the Gene Encoding α-Globin: Preliminary Analysis of Biomarkers Associated with Autophagy: M. Zurlo, et al.; Genes 14, 556 (2023), Abstract;

9. Short peptide domains of the Wnt inhibitor sFRP4 target ovarian cancer stem cells by neutralizing the Wnt β-catenin pathway, disrupting the interaction between β-catenin and CD24 and suppressing autophagy: S.M. Sundaram, et al.; Life Sci. 16, 121384 (2023), Abstract;

10. Surface-Modified Inhaled Microparticle-Encapsulated Celastrol for Enhanced Efficacy in Malignant Pleural Mesothelioma: X. Wang, et al.; Int. J. Mol. Sci. 24, 5204 (2023), Abstract;

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