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ELISA实验:你真的会ELISA加样吗?

更新时间:2024-07-05   点击次数:69次

在ELISA实验中,研究人员需要进行多次加样步骤完成实验操作。对于常规双抗体夹心法ELISA,一般有如下加样步聚,即加样本、加检测抗体、加酶结合物、加底物(最后加终止液停止反应)。

操作示意图.png

加样步骤基础知识

加样步骤中一般使用微量加样器(移液器,移液枪),按照实验规定的用量将液体成分加入酶标板孔板中。每次加入新的液体组分前,应更换新的吸头,以免液体组分间发生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加样。部分加样步骤需使用稀释后的液体组分,如标准品需要经复溶倍比稀释后上样,抗体、浓缩酶结合物需稀释为1×工作液,需要按照说明书的稀释要求,预先在试管、EP管等中按规定的稀释度稀释后再加样。


加抗体、酶结合物工作液和底物工作液时,可用定量多道加液器,节省加样的时间和操作,更好地保证孔与孔间的平行,减少因操作带来的误差。


在ELISA中,一般需进行45加样。“45加样"是什么?

45加样,应当为45度加样,即加样枪的吸头所在的直线应当与板条所在的直线呈45度角,吸头贴着孔壁加入。

 吸取样品时,加样枪吸头不应黏附多余的液体;加样时不可90度向孔中滴加液体,因为这样操作会导致液体残留在吸头上,导致加样不准确。

 吸头所在的直线与板条所在的直线所呈角度不可过小,会使液体残留在酶标板孔的孔壁上,导致加样不准确。

 不要将吸头伸入孔底,一方面若接触孔底可能压弯吸头,另一方面吸头浸入液面下容易产生气泡,导致加样不准确。


以上为ELISA实验中加样tips的全部内容,您学会了吗?

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