免疫组化试剂盒是一种用于生物样本分析的工具,常用于检测特定抗原或蛋白质在组织或细胞中的分布和表达。通过使用这种试剂盒,可以在组织切片或细胞涂片中标记出目标分子,从而帮助科学家、医生和研究人员了解疾病的机制、诊断病理、或研究特定生物标志物。 基本原理:
免疫组化技术通过抗原-抗体反应来进行检测。该试剂盒通常包含抗体、显色剂、抗原修复液、封闭液等。具体操作是将目标抗体(针对特定蛋白质或抗原)与样本中的抗原结合,并通过某种显色反应使目标位置显现出来,最终通过显微镜观察结果。
常见应用:
病理诊断:通过免疫组化分析,病理学家可以识别癌症或其他疾病相关的生物标志物。
细胞研究:检测特定蛋白在细胞内的分布。
临床研究:帮助了解不同疾病状态下的分子机制。
免疫组化试剂盒的使用方法
1.切片,烤片60℃1h。
2.脱蜡及复水。
3.PBS浸洗3次,每次3min。
4.抗原修复。(一般来说,常见的修复方式有:EDTA、柠檬酸、蛋白酶K,可根据一抗进行选择。)
5.PBS浸洗3次,每次3min。
6.30%H2O2(1000μlPBS+200μl30%H2O2)室温避光孵育15min。
7.PBS浸洗3次,每次3min。
8.加适量山羊血清封闭15min,覆盖住样本即可。
9.滴加一抗,4℃过夜孵育。
10.PBS浸洗3次,每次3min。
11.滴加抗小鼠生物素化二抗(使用浓度为1:100-1:300),37℃孵育1h。
12.PBS浸洗3次,每次3min。
13.滴加HRP标记链霉亲和素三抗(使用浓度为1:100-1:300),室温孵育30min。
14.PBS浸洗3次,每次3min。
15.DAB显色5min。(900μlPBS+50μl20xDAB显色液A+50μl20xDAB显色液B)
16.蒸馏水浸洗。
17.苏木素复染2-3min。
18.用1%的盐酸酒精分化数秒,自来水返蓝。
19.脱水透明。
20.中性树胶封片。