TLR9激动剂-CpG ODNs

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InvivoGen的CpG ODNs 优势

· 涵盖zui全的CpG寡聚脱氧核苷酸 （CpG ODN）或细菌DNA

· 生物学活性检测

· 随产品提供去内毒素水

· 高溶解度

CpG ODNs 是合成的单链DNA短片段，含有特定的非甲基化CpG二核苷酸序列。CpG ODNs含有部分或全部磷硫酰骨架（phosphorothioated (PS) backbone）。与细菌基因组DNA的磷酸二酯骨架相对（phosphodiester (PO) backbone）。

三个主要刺激性CpG ODNs的分类，是基于其结构特性与在人外周血单核细胞（PBMC），某些B细胞和 类浆树突细胞（pDC）的活性而划分。三类CpG ODNs是Class A (Type D), Class B (Type K) 和Class C。

Classes of CpG ODNs

- CpG-A ODNs 以含有CpG回文序列为中西的PO骨架和PS修饰的3’端poly-G链构成。CpG-A ODNs刺激类浆树突细胞（pDC）可以较强的产生IFN-a，但是会较弱的激活TLR9依赖的NF-kB信号通路，产生较少的促炎性细胞因子（如白细胞介素6）。

- CpG-B ODNs 是包含一个或多个CpG二核苷酸的完整PS骨架结构序列。CpG-B ODNs可以较强的活化B细胞和TLR9介导的NF-kB信号，但刺激分泌IFN-a的效果较弱。

- CpG-C ODNs 结构是Class A和B的混合体。它包含了完整的PS骨架和CpG回文序列。CpG-C ODNs可以较强的引起pDC分泌IFN-a，在刺激B细胞时也可以得到较好的效果。

Class A

Class A (type D) CpG ODNs (CpG-A ODNs) 以含有CpG回文序列为中西的PO骨架和PS修饰的3’端poly-G链构成。

Poly G 末端在分子间形成四分体，从而产生高分子量结构。这样的结构增强了稳定性与内涵体的胞内转运，促使大量IFN-a的产生和pDCs的成熟。

CpG-A ODNs也是NK细胞的强活化剂，其作用是通过间接的细胞因子信号来达到活化效果。

Ballas ZK. et al., 1996. Induction of NK activity in murine and human cells by CpG motifs in oligodeoxynucleotides and bacterial DNA. J Immunol. 157(5):1840-5. Krug A. et al., 2001. Identification of CpG oligonucleotide sequences with high induction of IFN-alpha/beta in plasmacytoid dendritic cells. Eur J Immunol. 31(7):2154-63. Verthelyi D. et al., 2001. Human peripheral blood cells differentially recognize and respond to two distinct CPG  motifs. J Immunol. 166(4):2372-7.

Class A CpG ODNs 刺激 HEK-Blue™ hTLR9 细胞 （货号：hkb-htlr9）

用不同浓度的A-class CpG ODNs, ODN 1585, ODN 2216 或 ODN 2236及相应的对照ODNs 刺激HEK-Blue™ hTLR9 细胞 （表达人源TLR9和NF-κB诱导 SEAP 报告基因, 刺激物与HEK-Blue Detection试剂共孵育24 小时, NF-ΚB-诱导 SEAP的水平在OD 655 nm检测。

Class A CpG ODNs 刺激 HEK-Blue™ mTLR9 细胞 （货号：mkb-htlr9）

用不同浓度的A-class CpG ODNs, ODN 1585, ODN 2216 或 ODN 2236及相应的对照ODNs 刺激HEK-Blue™ mTLR9 细胞 （表达鼠源TLR9和NF-κB诱导 SEAP 报告基因, 刺激物与HEK-Blue Detection试剂共孵育24 小时, NF-ΚB-诱导 SEAP的水平在OD 655 nm检测。

Class B

Class B (type K) CpG ODNs (CpG-B ODNs)是18-28摩尔的线性脱氧寡核苷酸。CpG-B ODNs 是包含一个或多个6摩尔CpG二核苷酸的完整PS骨架结构序列。人源的*序列是GTCGTT[1]，鼠源的*序列是GACGTT[2]。

CpG-B ODNs是B细胞和NK细胞的强刺激剂，对于IFN-a分泌的刺激效果却较弱[3,4]。CpG-B ODNs表现出较好的抗肿瘤效果以及Th1型佐剂的活性。

 Hartmann G & Krieg AM., 2000. Mechanism and function of a newly identified CpG DNA motif in human primary B cells. J Immunol. 164(2):944-53. 2- Krieg AM. et al., 1995. CpG motifs in bacterial DNA trigger direct B-cell activation. Nature. 374(6522):546-9. 3- Hartmann G. et al., 2000. Delineation of a CpG phosphorothioate oligodeoxynucleotide for activating primate immune responses in vitro and in vivo. J Immunol. 164(3):1617-24. 4- Gürsel M. et al., 2002. Differential and competitive activation of human immune cells by distinct classes of CpG oligodeoxynucleotide. J Leukoc Biol. 71(5):813-20.

Class B CpG ODNs 刺激 HEK-Blue™ hTLR9 细胞 （货号：hkb-htlr9）

用不同浓度的B-class CpG ODNs, ODN 1668, ODN 1826, ODN 2006 或 ODN 2007及相应的对照ODNs 刺激HEK-Blue™ hTLR9 细胞 （表达人源TLR9和NF-κB诱导 SEAP 报告基因, 刺激物与HEK-Blue Detection试剂共孵育24 小时, NF-ΚB-诱导 SEAP的水平在OD 655 nm检测。

Class B CpG ODNs 刺激 HEK-Blue™ mTLR9 细胞 （货号：mkb-htlr9）

用不同浓度的B-class CpG ODNs, ODN 1668, ODN 1826, ODN 2006 或 ODN 2007及相应的对照ODNs 刺激HEK-Blue™ mTLR9 细胞 （表达鼠源TLR9和NF-κB诱导 SEAP 报告基因, 刺激物与HEK-Blue Detection试剂共孵育24 小时, NF-ΚB-诱导 SEAP的水平在OD 655 nm检测。

Class C

Class C CpG ODNs (CpG-C ODNs)结构是Class A和B的混合体。它包含了完整的PS骨架和CpG回文序列。

C-Class CpG ODNs可以较强的引起pDC分泌IFN-a，在刺激B细胞时也可以得到较好的效果。C-Class CpG ODNs是很强的Th1-诱导性佐剂。

Vollmer J. et al., 2004. Characterization of three CpG oligodeoxynucleotide classes with distinct immunostimulatory activities. Eur J Immunol. 34(1):251-62.

Class C CpG ODNs 刺激 HEK-Blue™ hTLR9 细胞 （货号：hkb-htlr9）

用不同浓度的C-class CpG ODNs, ODN 2395 或 ODN M362及相应的对照ODNs 刺激HEK-Blue™ hTLR9 细胞 （表达人源TLR9和NF-κB诱导 SEAP 报告基因, 刺激物与HEK-Blue Detection试剂共孵育24 小时, NF-ΚB-诱导 SEAP的水平在OD 655 nm检测。

Class C CpG ODNs 刺激 HEK-Blue™ mTLR9 细胞 （货号：mkb-htlr9）

用不同浓度的C-class CpG ODNs, ODN 2395 或 ODN M362及相应的对照ODNs 刺激HEK-Blue™ mTLR9 细胞 （表达鼠源TLR9和NF-κB诱导 SEAP 报告基因, 刺激物与HEK-Blue Detection试剂共孵育24 小时, NF-ΚB-诱导 SEAP的水平在OD 655 nm检测。

正确选择ODN类型

ODN的品质经专业的实验室检测，并发表文献

绿字部分：实验结果表明，从InvivoGen购买的CpG-C， 不同批次的产品刺激细胞并产生IgG的效果均一稳定，而从Sigma 和Coley购买的产品活性则非常不连续