转染增强试剂是一类能够提高外源核酸分子进入细胞效率的辅助试剂。在分子生物学和细胞生物学研究中，将质粒DNA、小干扰RNA、信使RNA或其它核酸分子导入哺乳动物细胞是一项基础且频繁进行的实验操作。然而，常规转染方法在某些细胞类型（如悬浮细胞、原代细胞、干细胞或神经元）中可能面临效率偏低的问题。转染增强试剂的作用就是通过改善核酸与转染试剂的复合物稳定性、促进细胞摄取或加速内涵体逃逸等途径，帮助提升目标核酸进入细胞的比例，从而获得更好的基因过表达或基因沉默效果。
该试剂的主要价值在于拓展了高效转染的细胞适用范围。许多贴壁细胞系（如HEK293、HeLa）使用常规转染试剂即可获得相对满意的效率，但对于难转染细胞，单独使用脂质体或聚合物转染试剂往往效果不理想。转染增强试剂可作为补充方案，与现有转染试剂配合使用，减少因转染效率过低导致的实验失败风险。此外，部分增强试剂也能降低转染试剂的用量，减轻对细胞的毒性作用。以下从应用领域、作用原理和性能特点三个方面进行介绍。
一、应用领域
1、原代细胞转染。原代肝细胞、神经细胞、成纤维细胞等对DNA导入的耐受性较低，常规转染方法效率往往低于百分之十。使用转染增强试剂可将效率提升至百分之三十至百分之五十，适用于基因功能初筛和原代细胞基因编辑实验。
2、悬浮细胞转染。免疫细胞（如T细胞、NK细胞、巨噬细胞）以及造血干细胞等悬浮生长细胞，由于缺乏贴附状态且细胞膜较为敏感，转染难度较大。特定转染增强试剂能够促进核酸复合物与悬浮细胞的接触和内化。
3、难转染贴壁细胞。包括人胚胎干细胞、间充质干细胞、神经干细胞以及部分肿瘤细胞株（如PC12、MCF7）。这些细胞常因膜结构特殊或内涵体逃逸效率低而转染困难，增强试剂可协助克服这些障碍。
4、小干扰RNA介导的基因沉默实验。小干扰RNA转染要求较高的递送效率以产生足够的基因敲低效果。转染增强试剂可以提高小干扰RNA进入细胞质的比例，减少脱靶效应和细胞毒性。
5、CRISPR基因编辑。将质粒形式的CRISPR组件（Cas9和引导RNA）递送至细胞时，转染增强试剂有助于提升编辑效率，减少筛选阳性克隆的工作量。
6、病毒包装与生产。在HEK293T细胞中包装慢病毒或逆转录病毒时，转染增强试剂可提高质粒转染效率，进而提升病毒滴度。
二、作用原理
1、促进复合物稳定与浓缩。转染增强试剂通常含有阳离子聚合物或多价阳离子成分，能够与带负电的核酸形成更紧密的复合物颗粒。这些颗粒尺寸较小（一般在100至300纳米），表面带有适量的正电荷，有利于被细胞膜上的负电荷位点吸附。
2、增加细胞膜通透性。某些增强试剂（如氯喹衍生物或特定多肽）能够与细胞膜发生瞬时相互作用，轻微改变膜的结构有序性，使核酸复合物更容易通过内吞途径进入细胞。
3、促进内涵体逃逸。内涵体是一个酸性的亚细胞器，若核酸被滞留其中，容易被核酸酶降解而无法发挥功能。部分转染增强试剂具有质子海绵效应或膜融合活性，能够引起内涵体膨胀和破裂，帮助核酸释放到细胞质中。
4、减少复合物聚集沉淀。在高浓度或血清存在的条件下，转染复合物容易发生聚集沉淀，降低有效递送效率。一些增强试剂可作为分散稳定剂，保持复合物在培养基中的均匀分散。
5、协同作用机制。转染增强试剂并非独立完成核酸递送，而是与阳离子脂质体或阳离子聚合物等主要转染试剂协同工作。增强试剂通常在转染试剂与核酸形成复合物后加入，或在加入复合物的同时添加，以辅助细胞摄取和后期的胞内运输过程。
三、性能特点
1、广谱适用性。多数转染增强试剂对多种难转染细胞表现出相对广泛的适用性，可同时用于贴壁细胞和悬浮细胞。部分产品针对特定细胞类型（如悬浮免疫细胞）进行了配方优化。
2、操作便捷。增强试剂通常在细胞铺板后或转染复合物加入时直接添加到培养基中，无需额外换液或复杂的步骤。操作流程与常规转染实验相似，上手难度较低。
3、低细胞毒性。与增加转染试剂用量相比，使用增强试剂在不显著增加毒性的前提下提升效率。多数增强试剂对细胞活性的影响低于百分之十五，在优化条件下可控制在百分之十以内。
4、兼容多种核酸类型。转染增强试剂既适用于质粒DNA（大小可达10千碱基以上），也适用于小干扰RNA、反义寡核苷酸和信使RNA。部分增强试剂还支持CRISPR核糖核蛋白复合物的递送。
5、血清兼容性。某些增强试剂在含血清的培养基中仍保持活性，无需更换为无血清培养基，简化了操作流程。但不同产品的血清兼容性存在差异，使用前应查阅产品说明。
6、效率提升幅度。在优化条件下，转染增强试剂可将难转染细胞的转染效率提升二至五倍。具体提升幅度取决于细胞类型、核酸用量和基础转染试剂的种类。
7、批次间一致性。商业化转染增强试剂经过严格的质量控制，不同批次之间的活性差异通常控制在百分之十以内，有助于实验结果的重复和比较。
转染增强试剂是分子生物学实验中用于提高难转染细胞核酸递送效率的一类辅助产品。它通过促进复合物稳定、增加细胞摄取和协助内涵体逃逸等机制，与常规转染试剂协同发挥作用。在原代细胞、悬浮免疫细胞、干细胞以及小干扰RNA和CRISPR实验中，转染增强试剂具有较为实用的应用价值。了解其工作原理、适用细胞范围和操作特点，有助于实验人员根据具体实验需求选择合适的增强方案，减少因转染效率不足导致的实验重复和试剂浪费。对于从事基因功能研究和细胞治疗开发的科研人员而言，转染增强试剂可以作为优化转染条件的一个有益选项。
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