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dna损伤检测试剂盒的使用流程来学习下吧

发布时间:2022-10-13   点击次数:33次
  dna损伤检测试剂盒的关键技术参数包括板内差异、板间差异、批间差异、重复性、特异性、散布反应、回收率等。如果经常进行ELISA检测,建议使用同一个试剂盒。制造商,以尽可能保证数据的可重复性(当然,条件是测试条件的一致性)。至于用于科研的ELISA试剂盒,不同厂家使用的抗体对、酶和底物、生产技术和开发实力不同,不同厂家的试剂盒测得的数据也会不同。
  dna损伤检测试剂盒的使用流程:
  1、标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180ng/L,120ng/L,60ng/L,30ng/L,15ng/L)。
  2、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  3、温育:用封板膜封板后置38℃温育30分钟。
  4、配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
  5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
  7、温育:操作同3。
  8、洗涤:操作同5。
  9、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  10、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  11、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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